Čes. slov. farm. 2002, 51(6):301-304
Příprava bakulovirových transferových vektorů pro in vitro produkci izoenzymů P4501A1 a P4503A4
- Katedra biochemických věd, Centrum LN00B125, Farmaceutická fakulta UK, Hradec Králové
Cílem práce je příprava transferových vektorů pro in vitro syntézu mikrozomálních monooxygenasP4501A1 a P4503A4, které katalyzují oxidační přeměny většiny xenobiotik v organizmu pokusnýchzvířat i člověka. cDNA kódující oba proteiny byly získány podle protokolu UBMTA laskavostídržitelů a namnoženy běžnými metodami. Pro klonování těchto cDNA byly použity bakulovirovétransferové vektory. Tyto vektory obsahují silný polyhedrinový promotor, který je obklopen sekvencemihomologními s bakulovirovou DNA, umožňující rekombinaci vektoru s virovou DNA, a tími produkci zvoleného proteinu. Pro vložení cDNA do vektorů byly použity běžné klonovací postupya metoda PCR,úspěšnost vložení cílové sekvence byla ověřena metodou PCRse specifickými primerya pomocí restrikčních endonukleáz.
Klíčová slova: P4501A1; P4503A4; bakulovirový transferový vektor
The Construction of a Baculovirus Expression System for in vitro Production of Isoenzymes P4501A1 and P4503A4
The aim of this work is the construction of an expression system for in vitro synthesis of microsomalmonooxygenases P4501A1 and P4503A4, which catalyze oxidative transformations of most xenobioticsin both animal and human organisms. cDNAs encoding both proteins were obtained followingthe UBMTA protocol by the courtesy of holders, and amplified by established methods. Baculovirustransfer vectors were used to clone these cDNAs. These vectors contain a strong polyhedrinepromoter surrounded by sequences homologous to that of baculovirus DNA, allowing the recombinationof the vector with the viral DNA, and hence the production of a protein. Established methodsand PCR were used to insert cDNA into the vectors, and the insertion was verified by the PCRmethod with specific primers and using restriction endonucleases.
Keywords: P4501A1; P4503A4; baculovirus transfer vector
Zveřejněno: 1. červen 2002 Zobrazit citaci