| 173 / Čes. slov. Farm. 2024;73(3):169-174 / ČESKÁ A SLOVENSKÁ FARMACIE www.csfarmacie.cz FARMACEUTICKÁ TECHNOLOGIE Nové přístupy k problematice pyrogenů v parenterálních přípravcích a falešně pozitivní výsledky. I zde je ředění nejlepší volbou odstínění problému. Proteinové produkty nebo proteiny v krvi a krevních frakcích mohou vázat endotoxin a znemožnit jeho detekci v testu LAL. Alternativně některé proteázy degradují proteiny enzymové kaskády, zatímco jiné (např. trypsin) ji aktivují. Běžně se k denaturaci proteinu používá tepelné zpracování vzorku, čímž se umožní detekce endotoxinu odolného vůči teplu (13). b. Test rekombinantním faktorem C (Recombinant factor C test – rFC) (lékopisný článek 2. 6. 32) Jedná se o nejnovejší lékopisnou monografii pro hodnocení prítomnosti endotoxinu. Rekombinantní faktor C je geneticky upravený protein, který se normálně nachází v kaskádě lyzátu amebocytů Limulus. Faktor C reaguje s endotoxinem a spojuje se s markerem za vzniku kvantifikovatelného konečného produktu. Rekombinantní test faktoru C používá stejný princip jako test LAL, ale bez potřeby materiálu pocházejícího ze zvířat. V tomto testu lze použít dvě detekční techniky: techniku koncové fluorescence, založenou na detekci koncového bodu, která je založena na vývoji fluorescence po aktivaci syntetického komplexu peptid-fluorofor; nebo chromogenní technika, založená na vývoji barvy po rozštěpení syntetického komplexu peptid-chromofor. K přesné detekci endotoxinů se test provádí za použití materiálů bez endotoxinů s laboratorními kontrolami, které zabraňují neúmyslnému náhodnému uvolnění endotoxinů (14). Výpočty limitu endotoxinů pro jednotlivé léčivé přípravky Účinky endotoxinu souvisejí s množstvím endotoxinu v dávce přípravku podané pacientovi. Vzhledem k tomu, že se dávka liší u jednotlivých produktů, je limit endotoxinů vyjádřen jako K/M (Tab. 2, vzorec (1)). K je 5,0 EU/kg (kg), což představuje přibližnou prahovou dávku endotoxinu pro člověka a králíka po intravenózní aplikaci. Pokud je přípravek označen pro intratekální injekci, pak K je 0,2 EU/kg. M představuje zkušební dávku endotoxinu pro králíka nebo maximální dávku pro člověka na kilogram, která by byla podána za jednu hodinu, podle toho, která hodnota je větší. Příklady k řešení: Příklady ukazují možnosti výpočtu limitu endotoxinů pro jednotlivé léčivé přípravky jako maximální dávku léčivého přípravku/ kg podanou za jednu hodinu v případě intravenózního, respektive intratekálního parenterálního podání (výpočet 1., respektive 3.) a tytéž výpočty pro dospělou osobu, vážící 70 kg (výpočet 2., respektive 4.). 1. Produkt A, Maximální dávka M = 50 mg/kg, Dospělá osoba, Typ podání – intramuskulární, Délka podání – jednorázová, Koncentrace 25 mg/ml EL = EL = 0,1 EU/mg × 25 mg/ml = 2,5 EU/ml = 0,1 EU/mg 5 EU kg 50 mg kg 2. Produkt A, Maximální dávka M = 50 mg/dospělá osoba, Typ podání – intramuskulární, Délka podání – jednorázová, Koncentrace 25 mg/ml EL = EL = 7 EU/mg × 25 mg/ml = 175 EU/ml = 7 EU/mg 300 EU osoba 50 mg osoba 3. Produkt B, Maximální dávka M = 50 mg/kg, Dospělá osoba, Typ podání – intratekální, Délka podání – jednorázová, Koncentrace 25 mg/ml EL = EL = 0,004 EU/mg × 25 mg/ml = 0,1 EU/ml = 0,004 EU/mg 0,2 EU kg 50 mg kg Tab. 2. Výpočty limitu endotoxinů pro jednotlivé léčivé přípravky (15) Hodnoty pro K a M Způsob podání K M Intravenózní, u parenterálních přípravků injekce jiné než intravenózní (intramuskulární, subdermální) 5 EU/kg tělesné hmotnosti Maximální dávka léčivého přípravku/kg podaná za jednu hodinu Intravenózní dávka pro radiofarmaka 175 EU Objem maximální doporučené dávky v době použití Intratekální parenterální podání 0.2 EU/kg tělesné hmotnosti Maximální dávka léčivého přípravku/kg podaná za jednu hodinu Intratekální podání u radiofarmak 14 EU Objem maximální doporučené dávky v době použití Poznámka: U některých přípravků, například u vody na injekce, mnoha velkoobjemových parenterálních přípravků a nitroočních tekutin, kde není stanovena konkrétní dávka, jsou limity endotoxinů přiřazeny, nikoli vypočteny. Obvyklá dospělá osoba má hmotnost 70 kg. EL = K M (USP <85>, EP 2.6.14) Vzorec 1 EL – limit endotoxinu; K – přibližná prahová dávka endotoxinu pro člověka a králíka; M – zkušební dávka endotoxinu u králíka nebo maximální dávka pro člověka na kilogram, která by byla podána za jednu hodinu, podle toho, která hodnota je větší
RkJQdWJsaXNoZXIy NDA4Mjc=